doc_act

МУК 4.1.2865-11 Определение остаточных количеств Фенпропидина в зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур

Реклама

  Скачать документ



Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ



Реклама

Определение остаточных количеств
пестицидов в пищевых продуктах,
сельскохозяйственном сырье и объектах
окружающей среды

Сборник

МУК 4.1.2859 - 4.1.2866-11



Реклама

Москва 2011

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, профессор, канд. с-х. наук., Е.В. Довгилевич, ст.н.сотр., канд. биол. наук, А.В. Довгилевич, ст.н.сотр., канд. хим. наук, Н.В. Устименко, ст.н.сотр., канд. биол. наук, Е.Н. Щербинкина, инженер).



Реклама

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28 12.2010 № 3).

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.



Реклама

СОДЕРЖАНИЕ

Общие положения и область применения. 2

1. Метрологическая характеристика метода. 3

2. Метод измерения. 3

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы.. 3

4. Требования безопасности. 4

5. Требования к квалификации операторов. 5

6. Условия измерений. 5

7. Подготовка к определению.. 5

8. Отбор проб и хранение. 6

9. Проведение определения. 6

10. Обработка результатов анализа. 7

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 7

12. Оформление результатов. 7

13. Контроль качества результатов измерений. 8

14. Разработчики. 9

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

31 марта 2011 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ



Реклама

Определение остаточных количеств Фенпропидина
в зеленой массе, зерне и соломе зерновых культур методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания



Реклама

МУК 4.1.2865-11

Общие положения и область применения

Свидетельство об аттестации методики от 25.06.2010 № 01.5.04.686.

Настоящий документ устанавливает метод высокоэффективной жидкостной хроматографии для определения массовой концентрации Фенпропидина в зеленой массе и зерне зерновых культур в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг и в соломе в диапазоне 0,04 - 0,4 мг/кг.

Действующее вещество: Фенпропидин.



Реклама

Структурная формула:

Название действующего вещества по ИЮПАК: (RS)-l-[3-(4-тpeтбутилфенил)-2-метилпропил]пиперидин.

Молекулярная масса: 273,5.

Эмпирическая формула: C19H31N.



Реклама

Химически чистое вещество представляет собой бледно-желтую слегка вязкую жидкость без запаха.

Температура кипения > 250 °С, 70,2 °С/1,1 Ра.

Давление пара 17 мРа (25 °С).

Коэффициент распределения в системе н-октанол-вода: Kоw lgP = 2,9 (рН 7, 25 °С).

Растворимость в воде (мг/дм3, 25 °С): 530 (рН 7); 6,2 (рН 9).

Легко смешивается с ацетоном, этанолом, толуолом, н-октанолом и гексаном (25 °С). Стабилен при хранении в закрытом контейнере при комнатной температуре, по крайней мере, в течение 3 месяцев. Водные растворы устойчивы к воздействию УФ-света и гидролизу при 80 °С (рН 4,7 и 10). рКа 10,1 (сильное основание).

Краткая токсикологическая характеристика: у крыс острая оральная токсичность LD50 > 1447 мг/кг; при подкожном введении LD50 > 4000 мг/кг. Ингаляционная токсичность LD50 1220 мг в 1 м3 воздуха (Время экспозиции 4 ч). У кроликов вызывает раздражение кожи и глаз.

Не обладает мутагенным, канцерогенным и тератогенным действием.

Область применения: Фенпропидин - лиственный фунгицид системного действия с целебным защитным и искореняющим эффектом. Подавляет развитие таких заболеваний зерновых культур, как ложномучнистая роса, ржавчина и пятна на листьях, вызываемые, соответственно, фибами из родов Erysiphe graminis, Puccinia SPP и Rhynchosporium secalis.

Гигиенические нормативы в России для фенпропидина: МДУ в зерне хлебных злаков 0,25 мг/кг.

1. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Объект анализа

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), ?r, %

Показатель внутрилабораторной прецизионности, ?, %

Показатель воспроизводимости, ?R, %

Показатель точности* (границы относительной погрешности), ±?, %

Зеленая масса

0,01 - 0,10

6

7

8

16

Зерно

0,01 - 0,10

6

7

8

16

Солома

0,04 - 0,10

5

6

8

16

0,10 - 0,40

3

4

5

10

* Соответствует расширенной неопределенности Uотн (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2.

Таблица 2

Полнота извлечения Фенпропидина, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для n = 20, Р = 0.95

Анализируемый объект

Предел обнаружения, мг/кг

Диапазон определяемых концентраций, мг/кг

Среднее значение определения, %

Стандартное отклонение, S

Доверительный интервал среднего результата, ± %

Зеленая масса

0,01

0,01 - 0,1

87,3

5,15

2,4

Зерно

0,01

0,01 - 0,1

90,4

5,8

2,7

Солома

0,04

0,04 - 0,4

88,15

8,3

3,9

2. Метод измерения

Методика основана на определении Фенпропидина методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его экстракции из образцов смесью органического растворителя с водой и очистки экстракта путем перераспределения кислотно-основных форм Фенпропидина между двумя несмешивающимися фазами и методом твердофазной экстракции.

Идентификация Фенпропидина проводится по времени удерживания, количественное определение - методом абсолютной калибровки.

Избирательность метода обеспечивается сочетанием условий подготовки проб и хроматографирования.

3. Средства измерений, реактивы, вспомогательные устройства и материалы

3.1. Средства измерений

Жидкостный хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженным дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки

Весы аналитические ВЛА-200

ГОСТ 24104-2001

Весы технические BЛКT-500

ГОСТ 24104-2001

рН-метр фирмы «Наnnа Instrument», мод. Р212

Колбы мерные на 10, 50, 100, 1000 см3

ГОСТ 23932-90

Микродозаторы Ленпипет переменного объема от 200 до 1000 мм3 и от 1 до 5 см3

Пипетки градуированные

ГОСТ 29227-91

Цилиндры мерные на 50 и 100 см3

ГОСТ 23932-90

Допускается использование средств измерения с аналогичными или лучшими характеристиками.

3.2. Реактивы

Ацетон, чда

ГОСТ 2603-79

Ацетонитрил для ВЭЖХ, «В-230НМ» или хч

ТУ 6-09-3534-87

Гексан, хч

ТУ 2631-003-05807999-98

Вода бидистиллированная, деионизированная, Фенпропидин с содержанием основного вещества 97,7 %, Мактешим Аган

ГОСТ 6709-79

Натрий сернокислый, безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Соляная кислота, 0,1М водный раствор

Гидроксид натрия, 1М водный раствор

Подвижная фаза для ВЭЖХ: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

3.3. Вспомогательные устройства и материалы

Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (100?2,1) мм, 1,7 мкм (Waters) Ультразвуковая баня «Сапфир»

Воронки лабораторные В-75-110

ГОСТ 25336-82

Бидистиллятор

Ротационный вакуумный испаритель фирмы BUCHI, мод. R 205

Фильтры бумажные «красная лента»

ТУ 6.091678-86

Патроны, заполненные силикагелем 60 (Merck), 0,5 г

Допускается использование другого вспомогательного оборудования с техническими характеристиками не хуже указанных.

4. Требования безопасности

4.1. При работе необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда - ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

4.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

5. Требования к квалификации операторов

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 13.

6. Условия измерений

При выполнении измерений выполняют следующие условия:

• процессы приготовления растворов и подготовки проб к анализу проводят при температуре воздуха 20 ± 5 °С и относительной влажности не более 80 %.

• выполнение измерений на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

7. Подготовка к определению

7.1. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (Acquity ВЕН С18) кондиционируют в потоке подвижной фазы (0,1 - 0,2 см3/мин) до стабилизации нулевой линии.

7.2. Приготовление растворов

7.2.1. 0,005 М раствор ортофосфорной кислоты: 0,5 ± 0,01 г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

7.2.2. Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60 по объему, используя мерные цилиндры.

7.2.3. Приготовление элюента для твердофазной экстракции. В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 20 см3 ацетона и доводят объем до метки гексаном. Перемешивают. Элюент хранят в вытяжном шкафу и используют свежеприготовленным.

7.3. Приготовление основного и градуировочных растворов

7.3.1. Основной раствор с концентрацией 0,5 мг/см3: точную навеску Фенпропидина (50 ± 0,5 мг) помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3, растворяют в ацетонитриле и доводят объем до метки тем же растворителем.

Градуировочные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,5, 0,75 и 1,0 мкг/см3 готовят методом последовательного разбавления основного раствора по объему, используя подвижную фазу.

7.3.2. Раствор № 1 с концентрацией 1,0 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 100 см3 вносят 0,2 см3 основного раствора и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.3. Раствор № 2 с концентрацией 0,75 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 вносят 7,5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.4. Раствор № 3 с концентрацией 0,5 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 5 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.5 Раствор № 4 с концентрацией 0,2 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 2,0 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

7.3.6. Раствор № 5 с концентрацией 0,1 мкг/см3: в мерную колбу вместимостью 10 см3 помещают 1 см3 раствора № 1 и доводят объем до метки подвижной фазой.

Основной раствор можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца, градуировочные растворы - в течение суток.

При изучении полноты определения Фенпропидина в зеленой массе, зерне и соломе пшеницы используют ацетонитрильные растворы вещества.

7.4. Построение градуировочного графика

Для установления градуировочной характеристики (площадь пика - концентрация Фенпропидина в растворе) в хроматограф вводят по 10 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций). Затем измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации Фенпропидина в градуировочном растворе.

Методом наименьших квадратов рассчитывают градуировочный коэффициент (К) в уравнении линейной регрессии:

С = KS, где

S - площадь пика градуировочного раствора.

Градуировку признают удовлетворительной, если значение коэффициента линейной корреляции оказывается не ниже 0,99.

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента.

Градуировочную зависимость признают стабильной при выполнении следующего условия:

С - аттестованное значение массовой концентрации Фенпропидина в градуировочном растворе;

Ск - результат контрольного измерения массовой концентрации Фенпропидина в градуировочном растворе;

?контр - норматив контроля градуировочного коэффициента, % (?контр = 10 % при Р = 0,95).

7.5. Подготовка патронов для твердофазной экстракции

Непосредственно перед употреблением через патрон, заполненный силикагелем, пропускают 2,5 см3 гексана.

8. Отбор проб и хранение

Отбор проб зерна производится в соответствии с ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) «Зерновые. Отбор проб зерна». Пробы зерна и соломы для определения остатков в урожае хранят в бумажной или тканевой упаковке при комнатной температуре. Перед анализом зерно и солому измельчают на лабораторных мельницах.

9. Проведение определения

9.1. Определение Фенпропидина в зеленой массе, зерне и соломе пшеницы

20 гзерна или измельченной зеленой массы или 5 г соломы помешают в коническую колбу вместимостью 250 см3 и экстрагируют 75 см3 смеси ацетона и воды в соотношении 7:3 в ультразвуковой бане в течение 15 мин. Массу фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют с тем же объемом экстрагента. Объединенный экстракт упаривают на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С до полного удаления ацетона. Объем водного остатка доводят до 80 см3, подкисляют 1М раствором хлористоводородной кислоты до рН 3,0 и промывают дважды по 25 см3 гексана. Гексановый экстракт отбрасывают. К отделенному водному слою прибавляют около 5 см3 1М раствора гидроксида натрия до рН 9,0 и экстрагируют фенпропидин трижды по 25 см3 гексана. Экстракт фильтруют через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре водяной бани не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2,0 см3 гсксана и вносят в откондиционированный патрон, заполненный силикагелем. Патрон промывают 2 см3 гексана. Промывку отбрасывают. Фенпропидин элюируют 2 см3 элюента, приготовленного по п. 7.2.3. Элюат упаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 1 см3 подвижной фазы, 10 мм3 полученного раствора вводят в хроматограф.

9.2. Условия хроматографирования

Ультраэффективный жидкостной хроматограф «ACQUITY» фирмы «Waters» с быстросканирующим УФ-детектором, снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки. Аналитическая колонка ACQUITY UPLC ВЕН С18 (2,1?100) мм, 1,7 мкм (Waters). Температура колонки (30 ± 1) °С. Подвижная фаза: смесь ацетонитрила и 0,005 М ортофосфорной кислоты в соотношении 40:60. Скорость потока элюента: 0,2 см3/мин. Рабочая длина волны УФ-детектора 220 нм. Объем вводимой пробы 10 мм3.

Время удерживания Фенпропидина 4,7 ± 0,1 мин.

Линейный диапазон детектирования сохраняется в интервале концентраций 0,1 - 1,0 мкг/см3.

10. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки. Содержание Фенпропидина в зеленой массе, зерне и соломе пшеницы (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

Sx - площадь пика Фенпропидина на хроматограмме испытуемого образца, мм2 (AU);

К - градуировочный коэффициент, найденный на стадии построения соответствующей градуировочной зависимости;

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;

Р - навеска анализируемого образца, г;

f - полнота извлечения Фенпропидина, приведенная в табл. 2 (%).

Содержание остаточных количеств фенпропидина в образце вычисляют как среднее из двух параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор Фенпропидина с концентрацией 1,0 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

11. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает предела повторяемости (1):

Х1 и Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (r = 2,8?r).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

12. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± ?) мг/ кг при вероятности Р = 0,95, где

Х - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

? - граница абсолютной погрешности, мг/кг.

? - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения»(например: менее 0,01 мг/кг*, где * - 0,01 мг/кг - предел обнаружения Фенпропидина в зеленой массе и зерне пшеницы).

13. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

13.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

13.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Сд должна удовлетворять условию:

Сд = ?ЛX' + ?ЛX', где

±?ЛX' (±?ЛX') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

?Л = ±0,84?, где

? - граница абсолютной погрешности, мг/кг:

? - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

Кк = X' - X - Сд, где

X', X, Сд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 11) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

(1)

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|Кк| ? К,

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

13.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости.

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

(3)

X1 и Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

14. Разработчики

Долженко В.И., Цибульская И.А., Журкович И.К., Луговкина Н.В., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений, г. Санкт-Петербург).

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.2.015.25.11.09 от 26.11.09).




Реклама: ;


Самые популярные документы раздела



Рейтинг@Mail.ru Яндекс.Метрика