doc_act

МУК 4.1.2864-11 Методика измерений остаточных количеств Тиабендазола в семенах и в масле рапса

Реклама

  Скачать документ



Государственное санитарно-эпидемиологическое нормирование
Российской Федерации

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ



Реклама

Определение остаточных количеств
пестицидов в пищевых продуктах,
сельскохозяйственном сырье и объектах
окружающей среды

Сборник

МУК 4.1.2859 - 4.1.2866-11



Реклама

Москва 2011

1. Разработаны Российским государственным аграрным университетом - МСХА им. К.А. Тимирязева, Учебно-научный консультационный центр «Агроэкология пестицидов и агрохимикатов» Минсельхоза России (В.А. Калинин, профессор, канд. с-х. наук., Е.В. Довгилевич, ст.н.сотр., канд. биол. наук, А.В. Довгилевич, ст.н.сотр., канд. хим. наук, Н.В. Устименко, ст.н.сотр., канд. биол. наук, Е.Н. Щербинкина, инженер).

2. Рекомендованы к утверждению Комиссией по санитарно-эпидемиологическому нормированию при Федеральной службе по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека (протокол от 28 12.2010 № 3).



Реклама

3. Утверждены руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации Г.Г. Онищенко 31 марта 2011 г.

4. Введены в действие с момента утверждения.

5. Введены впервые.

СОДЕРЖАНИЕ



Реклама

Общие положения и область применения. 2

1. Краткая характеристика препарата. 2

2. Методика определения Тиабендазола в семенах и масле рапса методом ВЭЖХ.. 2

3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений. 7

4. Оформление результатов. 7

5. Контроль качества результатов измерений. 8

6. Требования безопасности. 9

7. Требования к квалификации оператора. 9

8. Разработчики. 9

УТВЕРЖДАЮ

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко

31 марта 2011 г.

Дата введения: с момента утверждения

4.1. МЕТОДЫ КОНТРОЛЯ. ХИМИЧЕСКИЕ ФАКТОРЫ



Реклама

Методика измерений остаточных количеств
Тиабендазола в семенах и масле рапса методом
высокоэффективной жидкостной хроматографии

Методические указания



Реклама

МУК 4.1.2864-11

Общие положения и область применения

Свидетельство об аттестации методики от 23.11.2010 № 01.5.04.693.

Настоящие методические указания устанавливают метод измерения массовой концентрации Тиабендазола в семенах и масле рапса в диапазоне концентраций 0,01 - 0,1 мг/кг.

1. Краткая характеристика препарата



Реклама

Действующее вещество: Тиабендазол.

Структурная формула:

Название действующего вещества по ИЮПАК: 2-(1,3-тиазол-4-ил) бензимидазол.

2-(4-тиазолил)-1Н-бензимидазол (С.А.).



Реклама

Эмпирическая формула: C10H7N3S.

Молекулярная масса: 201,3.

Белое кристаллическое вещество. Температура плавления: 297 - 298 °С. Давление паров при 25 °С: 4,6?10-4 мПа. Коэффициент распределения н-октанол-вода: Kow logР = 2,39 (рН 7).

Растворимость (г/л) при 20 °С: н-гептан - < 0,01, ксилол - 0,13, ацетон - 2,43, 1,2-дихлорэтан - 0,81, метанол - 8,28, этилацетат - 1,49, н-октанол - 3,91, вода - 10,0 (рН 2), 0,16 (рН 4), 0,03 (рН 7 - 10). Устойчив к гидролизу. Водный фотолиз (20 °С, рН 5, DT50 29 ч); pКa1 = 4,73; рКа2 = 12,00.

Краткая токсикологическая характеристика: Острая пероральная токсичность (LD50) для мышей - 3600 мг/кг, крыс - 3100 мг/кг, кроликов - 3800 мг/кг, птиц - более 2250 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для кроликов - более 2000 мг/кг, не ирритант; ингаляционная токсичность (LС50) для крыс - более 0,5 мг/кг. Не токсичен для пчел. СК50 для рыб 0,55 мг/л при экспозиции 96 ч. Класс токсичности по ВОЗ-III.

Область применения: Тиабендазол - системный фунгицид защитного и лечебного действия. Тиабендазол образует защитный слой на обработанной поверхности, используется на овощных, плодовых и зерновых культурах. Не совместим с купратами и окисляющими агентами, такими как хлораты и нитраты.

Гигиенические нормативы для Тиабендазола в семенах и масле рапса в России не установлены.

2. Методика определения Тиабендазола в семенах и масле рапса методом ВЭЖХ

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении Тиабендазола методом ВЭЖХ с использованием УФ-детектора после его извлечения из образцов органическим растворителем с последующей очисткой на колонке с силикагелем.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

При соблюдении всех регламентированных условий проведения анализа в точном соответствии с данной методикой погрешность (и ее составляющие) результатов измерений при доверительной вероятности Р = 0,95 не превышает значений, приведенных в табл. 1 для соответствующих диапазонов концентраций.

Таблица 1

Метрологические параметры

Диапазон измерений, массовая концентрация, мг/кг

Показатель повторяемости (относительное среднеквадратическое отклонение повторяемости), ?r %

Показатель промежуточной прецизионности (относительное среднеквадратическое отклонение в условиях вариации факторов «время», «оператор» в одной лаборатории), ?, %

Показатель воспроизводимости (относительное среднеквадратическое отклонение воспроизводимости), ?R, %

Показатель точности* (границы относительной погрешности при вероятно­сти Р = 0,95), ±?, %

Семена рапса от 0,01 до 0,10 вкл.

5

12

14

24

Масло рапса от 0,01 до 0,10 вкл.

6

7

8

16

* Соответствует расширенной неопределенности Uотн при коэффициенте охвата k = 2.

Полнота извлечения вещества, стандартное отклонение, доверительный интервал среднего результата для полного диапазона концентраций (n = 20) приведены в табл. 2.

Таблица 2

Объект анализа

Предел обнаружения, мг/кг

Диапазон измеряемых концентраций, мг/кг

Среднее значение определения, %

Стандартное отклонение, S, %

Доверительный интервал среднего

результата, ±%

Семена рапса

0,01

0,01 - 0,1

89,4

2,7

5,3

Масло рапса

0,01

0,01 - 0,1

89,8

1,1

2,3

2.1.3. Избирательность метода

Избирательность метода определения Тиабендазола достигается сочетанием условий подготовки проб и хроматографического анализа.

2.2. Реактивы и материалы

Ацетон, осч

ТУ 6-09-3513-86

Ацетонитрил для ВЭЖХ, сорт 1 или хч

ТУ 6-09-3534-87

Бумажные фильтры «красная лента»

ТУ 2642-001-42624157-98

Вода бидистиллированная, деионизированная

ГОСТ 6709-79

н-Гексан, хч, свежеперегнанный

ТУ 2631-003-05807999-98

Изопропиловый спирт

ТУ 2632-015-11291058-95

Калий углекислый, хч

ГОСТ 4221-76

Калия перманганат

ГОСТ 20490-75

Кальция хлорид, хч

ГОСТ 4161-77

Кислота ортофосфорная, хч, 0,005 М водный раствор

ГОСТ 6552-80

Кислота серная, хч

ГОСТ 4204-77

Натрий двууглекислый

ГОСТ 83-79

Натрий сернокислый безводный, ч, свежепрокаленный

ГОСТ 4166-76

Натрий хлористый, чда

ГОСТ 4233-77

Натрия гидроксид, хч

ГОСТ 4328-77

Подвижная фаза для ВЭЖХ: ацетонитрил: 0,005 М раствор Н3РО4 (40:60, по объему)

Силикагель для колоночной хроматографии 60 (0,040 - 0,063 mm) («Merck», Германия)

Стекловата

Тиабендазол, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,8 % (Cheminova)

Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан - ацетон (80:20, по объему)

Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан - ацетон (15:85, по объему)

Допускается использование реактивов квалификацией не ниже указанных.

2.3. Приборы и посуда

Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-детектором (Waters 2487) с дегазатором и автоматическим пробоотборником или аналогичный

Колонка Spherisorb Phenyl (150?4,6) мм, 3 мкм (Waters, USA) или аналогичная

Ванна ультразвуковая УЭВ-1,3, или аналогичная

ГОСТ Р МЭК 60335-2-15-98

Весы аналитические BЛA-200 или аналогичные

ГОСТ 24104-2001

Мельница лабораторная зерновая ЛMЗ

ТУ 1-01-0593-79

Гомогенизатор

МРТУ 42-1505-63

Ротационный испаритель вакуумный Buchi R-205 или аналогичный

Бидистиллятор рН-метр универсальный ЭВ-74

ГОСТ 22261-76

Насос водоструйный

МРТУ 42 861-64

Колбы плоскодонные на шлифах КШ500 29/32 ТС

ГОСТ 10384-72

Колбы круглодонные на шлифах КШ10 и КШ250 29-32 ТС

ГОСТ 10384-72

Воронки лабораторные В-75-110

ГОСТ 25336-82

Воронки делительные ВД-3-250 и 500

ГОСТ 8613-75

Цилиндры мерные на 50, 100, 500 и 1000 см3

ГОСТ 1774-74

Колбы мерные на 25, 50, 100 и 1000 см3

ГОСТ 1770-74

Пипетки на 1, 2, 5, 10 см3

ГОСТ 22292-74

Колонки стеклянные (25?1) см

Допускается использование приборов и посуды с метрологическими характеристиками не ниже указанных.

2.4. Отбор проб

Отбор проб семян рапса производится в соответствии с ГОСТ 10852-86 «Семена масличные. Правила приемки и методы отбора проб». Семена хранят при комнатной температуре в полотняных мешочках, перед анализом доводят до стандартной влажности и измельчают. Растительное масло хранят в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в герметично закрытой стеклянной таре в течение 2 месяцев.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Перед началом работы проверяют чистоту применяемых органических растворителей. Для этого 100 см3 растворителя упаривают в ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 °С до объема 1,0 см3 и хроматографируют. При обнаружении мешающих определению примесей очистку растворителей производят в соответствии с общепринятыми методиками.

2.5.2. Кондиционирование колонки

Перед началом анализа колонку (Spherisorb Phenyl) кондиционируют в потоке подвижной фазы (1 см3/мин) до стабилизации нулевой линии в течение 1 - 2 ч.

2.5.3. Приготовление растворов

Для приготовления 0,005 М раствора ортофосфорной кислоты 0,5 г 98 % ортофосфорной кислоты помещают в мерную колбу объемом 1 дм3, растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до метки.

Для приготовления подвижной фазы смешивают ацетонитрил с 0,005 М раствором ортофосфорной кислоты в соотношении 50:50 по объему, используя мерные цилиндры.

Для приготовления элюента № 1 в колбе на 1000 мл смешивают 800 мл н-гексана и 200 мл ацетона. Для приготовления элюента № 2 в колбе на 1000 мл смешивают 150 мл н-гексана и 850 мл ацетона.

Приготовление стандартного и градуировочных растворов:

Берут точную навеску Тиабендазола (50 мг), переносят в мерную колбу на 50 мл, растворяют навеску в ацетонитриле и доводят до метки (стандартный раствор с концентрацией 1,0 мг/см3).

Градуировочные растворы с концентрациями 0,1, 0,2, 0,5, 1,0 и 2,0 мгк/cм3 готовят методом последовательного разбавления по объему, используя раствор подвижной фазы [смесь ацетонитрил - 0,005 М Н3РО4 (40:60, по объему)]. Стандартный и градуировочные растворы можно хранить в холодильнике при температуре 0 - 4 °С в течение 1 месяца.

Для внесения в контрольный образец при определении полноты извлечения используют стандартный раствор, разбавленный ацетонитрилом до нужного уровня концентраций методом последовательного разбавления. Растворы для внесения в масло готовят из стандартного раствора с концентрацией 0,5 мг/см3 методом последовательного разбавления по объему изопропиловым спиртом.

2.5.4. Построение градуировочного графика

Для построения градуировочного графика (площадь пика - концентрация Тиабендазола в растворе) в хроматограф вводят по 20 мм3 градуировочных растворов (не менее 3 параллельных измерений для каждой концентрации, не менее 4 точек по диапазону измеряемых концентраций), измеряют площади пиков и строят график зависимости среднего значения площади пика от концентрации Тиабендазола в градуировочном растворе (мкг/см3).

Градуировочную характеристику необходимо проверять при замене реактивов, хроматографической колонки или элементов хроматографической системы, а также при отрицательном результате контроля градуировочного коэффициента:

?контр. - норматив контроля градуировочного коэффициента, %. (?контр. = 10 % при Р = 0,95).

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1 см помещают тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 30 см3 смеси гексан-ацетон (80:20, по объему). Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента. Колонку последовательно промывают 30 см3 элюента № 2 и 30 см3 элюента № 1 со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения Тиабендазола на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 см3 отбирают 0,1 см3 стандартного раствора Тиабендазола с концентрацией 10 мкг/см3. Отдувают растворитель током теплого воздуха (температура не выше 40 °С), остаток растворяют в 5 см3 элюента № 1 и наносят на колонку. Колбу обмывают еще 5 см3 элюента № 1 и также вносят на колонку. Промывают колонку 50 см3 элюента № 1, которые отбрасывают, затем 100 см3 элюента № 2 со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 см3 каждая, упаривают, остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ (п. 2.5.3) и анализируют на содержание Тиабендазола (п. 2.6.3).

Фракции, содержащие Тиабендазол, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ и вновь анализируют (п. 2.6.3). Рассчитывают содержание Тиабендазола в элюате, определяя полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для этого объем элюента.

Примечание: параметры удерживания Тиабендазола и сопутствующих экстрактивных веществ могут меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.5.7. Подготовка приборов и средств измерения

Установка и подготовка всех приборов и средств измерения проводится в соответствии с требованиями технической документации.

2.6. Проведение определения

2.6.1. Извлечение Тиабендазола из проб семян и масла рапса

Навеску измельченных семян массой 20 г помещают в коническую колбу емкостью 100 мл и экстрагируют Тиабендазол 40 см3 ацетонитрила на ультразвуковой установке в течение 15 мин. Суспензию фильтруют через бумажный фильтр «красная лента». Экстракцию повторяют дважды порциями по 30 см3.

Навеску масла массой 20 г помещают в делительную воронку емкостью 250 см3 и экстрагируют Тиабендазол трижды ацетонитрилом порциями по 30 см3, встряхивая смесь каждый раз в течение 2 - 3 мин и собирая нижний органический слой.

Объединенные экстракты семян или масла промывают гексаном в делительных воронках дважды по 25 см3, встряхивая смесь каждый раз в течение 1 - 2 мин и собирая нижний органический слой.

После этого экстракты выпаривают досуха на ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Дальнейшую очистку экстрактов проводят на колонке с силикагелем по п. 2.6.2.

Внимание! Отделение ацетонитрильного слоя следует производить только после полного расслоения жидкостей в делительной воронке.

2.6.2. Очистка на колонке с силикагелем

Сухой остаток в колбе, полученный при упаривании очищенных по п. 2.6.1 экстрактов растительных материалов, количественно переносят двумя порциями смеси гексан-ацетон (80:20, по объему) по 5 см3 каждая в кондиционированную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 50 см3 элюента № 1, который отбрасывают. Тиабендазол элюируют 80 см3 элюента № 2, собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 250 см3. Раствор упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при температуре не выше 40 °С. Сухой остаток растворяют в 2 см3 подвижной фазы для ВЭЖХ и 20 мм3 раствора вводят в жидкостный хроматограф.

2.6.3. Условия хроматографирования

Жидкостный хроматограф «Альянс» фирмы «Waters» с УФ-детектором (Waters 2 487), снабженный дегазатором, автоматическим пробоотборником и термостатом колонки.

Колонка Spherisorb Phenyl (150?4,6) мм, 3 мкм (Waters, USA).

Температура колонки 30 ± 1 °С.

Подвижная фаза для ВЭЖХ: ацетонитрил: 0,005 М раствор Н3РО4 (40:60, по объему).

Скорость потока элюента: 1 мл/мин.

Рабочая длина волны 300 нм.

Объем вводимой пробы 20 мм3.

Линейный диапазон детектирования 0,1 - 2,00 мкг/мл.

2.6.4. Обработка результатов анализа

Количественное определение проводят методом абсолютной калибровки, содержание Тиабендазола в образцах семян или масла (X, мг/кг) вычисляют по формуле:

S1 - площадь пика Тиабендазола в стандартном растворе, мм2 (мв•сек);

S2 - площадь пика Тиабендазола в анализируемой пробе, мм2 (мв•сек);

V - объем пробы, подготовленной для хроматографического анализа, см3;

Р - навеска анализируемого образца, г;

С - концентрация стандартного раствора Тиабендазола, мкг/см3;

Содержание остаточных количеств Тиабендазола в анализируемом образце вычисляют как среднее из 2 параллельных определений.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор Тиабендазола 2 мкг/см3, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.

3. Проверка приемлемости результатов параллельных определений

За результат анализа принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает придела повторяемости (1):

(1)

X1, Х2 - результаты параллельных определений, мг/кг;

r - значение предела повторяемости (r = 2,8?r).

При невыполнении условия (1) выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и вновь выполняют анализ.

4. Оформление результатов

Результат анализа представляют в виде:

(X ± ?) мг/кг при вероятности Р = 0,95, где

X - среднее арифметическое результатов определений, признанных приемлемыми, мг/кг;

? - граница абсолютной погрешности, мг/кг;

? = ?•X/100, где

? - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

В случае если содержание компонента менее нижней границы диапазона определяемых концентраций, результат анализа представляют в виде:

«содержание вещества в пробе менее нижней границы определения»(например: менее 0,01 мг/кг*, где * - 0,01 мг/кг - предел обнаружения Тиабендазола в рапсе).

5. Контроль качества результатов измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-1-6-2002 «Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений».

5.1. Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов.

5.2. Плановый внутрилабораторный оперативный контроль процедуры выполнения анализа проводится с применением метода добавок.

Величина добавки Cд должна удовлетворять условию:

Cд = ?л,Х + ?л,Х', где

±?л,Х (±?л,Х') - характеристика погрешности (абсолютная погрешность) результатов анализа, соответствующая содержанию компонента в испытуемом образце (расчетному значению содержания компонента в образце с добавкой, соответственно), мг/кг; при этом:

?л = ±0,84?, где

? - граница абсолютной погрешности, мг/кг: где

? = ?•X/100, где

? - граница относительной погрешности методики (показатель точности в соответствии с диапазоном концентраций), %.

Результат контроля процедуры Кк рассчитывают по формуле:

Кк = X' - X - Cд, где

X', X, Cд - среднее арифметическое результатов параллельных определений (признанных приемлемыми по п. 4) содержания компонента в образце с добавкой, испытуемом образце, концентрация добавки соответственно, мг/кг.

Норматив контроля К рассчитывают по формуле:

Проводят сопоставление результата контроля процедуры (Кк) с нормативом контроля (К).

Если результат контроля процедуры удовлетворяет условию:

|Кк| ? К,

(2)

процедуру анализа признают удовлетворительной.

При невыполнении условия (2) процедуру контроля повторяют. При повторном невыполнении условия (2) выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и принимают меры к их устранению.

5.3. Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости:

Расхождение между результатами измерений, выполненных в двух разных лабораториях, не должно превышать предела воспроизводимости (R):

(3)

Х1, Х2 - результаты измерений в двух разных лабораториях, мг/кг;

R - предел воспроизводимости (в соответствии с диапазоном концентраций), %.

6. Требования безопасности

6.1. При работе необходимо соблюдать требования техники безопасности, установленные для работ с токсичными, едкими, легковоспламеняющимися веществами (ГОСТ 12.1.005, ГОСТ 12.1.007). Организация обучения работников безопасности труда по ГОСТ 12.0.004.

При выполнении измерений с использованием жидкостного хроматографа и работе с электроустановками соблюдать правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкциями по эксплуатации приборов.

6.2. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией, соответствовать требованиям пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-91 и иметь средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать норм, установленных ГН 1.2.2701-10 и ГН 2.2.5.1313-03 «Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны».

7. Требования к квалификации оператора

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист-химик, имеющий опыт работы методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, ознакомленный с руководством по эксплуатации жидкостного хроматографа, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений по п. 5.

8. Разработчики

Цибульская И.А., Черменская Т.Д., Ковров Н.Г. (ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт защиты растений Россельхозакадемии, г. Санкт-Петербург).

Методика прошла метрологическую экспертизу (Свидетельство об аттестации № 01.5.04.686) и внесена в Федеральный реестр (ФР. 1.31.2011.09107).




Реклама: ;


Самые популярные документы раздела



Рейтинг@Mail.ru Яндекс.Метрика