doc_act

МУК 4.1.1967-05 Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда

Реклама

  Скачать документ



4.1. Методы контроля. Химические факторы

Методические указания МУК 4.1.1967-05
"Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии"

(утв. Главным государственным санитарным врачом РФ 21 апреля 2005 г.)

Дата введения: 1 июля 2005 г.



Реклама

Введены впервые

1. Вводная часть

Действующее вещество: крезоксим-метил (BAS 490 F).

(Е)-метил-2-метоксиимино-2-/2-(о-толилокси-метил)фенил/ацетат (ИЮПАК).

Структурная формула:



Реклама

МУК 4.1.1967-05 Определение остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда

Эмпирическая формула: C18H19NO4.

Молекулярная масса: 313,4.

Белое кристаллическое вещество со слабым запахом.

Температура плавления: 97,2 - 101,7 °С



Реклама

Давление паров при 20 °С: 2,3 ? 10-3 мПа

Растворимость (г/л) при 20 °С: вода - 0,002, гептан - 1,7, толуол - 111, дихлорметан - 939, метанол - 14,9, ацетон - 217, этилацетат - 123.

Стабильность к гидролизу при 20 °С: DT50 = 34 дня (рН 7), 7 часов (рН 9)

В биологически активных почвах в аэробных условиях крезоксим-метил быстро разрушается: DT90 = менее 3 дней.

Краткая токсикологическая характеристика



Реклама

Острая пероральная токсичность (LD50) для крыс - более 5000 мг/кг; острая дермальная токсичность (LD50) для крыс - более 2000 мг/кг. Крезоксим-метил не оказывает раздражающего действия на кожу и слизистую оболочку глаз кролика, не обладает мутагенными и сенсибилизирующими свойствами.

Крезоксим-метил нетоксичен для пчел, дождевых червей, полезных насекомых и птиц.

Гигиенические нормативы

ВМДУ в огурцах, томатах и винограде - 0,5 мг/кг.

Область применения препарата



Реклама

Крезоксим-метил - синтетический фунгицид из класса стробилуринов, являющихся продуцентами гриба Strobilurus tenacellus. Вещество эффективно против широкого круга грибных патогенов хлебных злаков, овощных, кормовых, технических и плодовых культур. Обладает защитным, лечебным и искореняющим действием.

2. Методика определения остаточных количеств крезоксим-метила в огурцах, томатах, ягодах и соке винограда методом газожидкостной хроматографии

2.1. Основные положения

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на газохроматографическом определении крезоксим-метила на неподвижной фазе OV-17 с использованием электронозахватного детектора (ЭЗД) после экстракции препарата из сока гексаном, из растительного материала водным ацетоном, предварительной очистки экстрактов перераспределением в системе несмешивающихся растворителей и окончательной очистки экстрактов на колонке с силикагелем.



Реклама

Количественное определение проводится методом абсолютной калибровки.

2.1.2. Избирательность метода

В предлагаемых условиях метод специфичен в присутствии пестицидов, применяемых при возделывании огурцов, томатов и винограда.

2.1.3. Метрологическая характеристика метода

Таблица



Реклама

Метрологические параметры метода

Анализируемый объект

Метрологические параметры, Р = 0,95, n = 20

предел обнаружения, мг/дм3, мг/кг

диапазон определяемых концентраций, мг/дм3, мг/кг

среднее значение определения, %

стандартное отклонение S, %

относительное отклонение DS, %

доверительный интервал среднего, %

Огурцы

0,1

0,1 - 1,0

91,8

2,3

1,0

±2,1

Томаты

0,1

0,1 - 1,0

90,7

2,3

1,0

±2,1

Виноград

0,1

0,1 - 1,0

90,0

3,3

1,5

±3,1

Сок

0,1

0,1 - 1,0

92,4

2,8

1,2

±2,6

2.2. Реактивы, растворы и материалы



Реклама

Крезоксим-метил, аналитический стандарт с содержанием д.в. 99,9 % (БАСФ, Германия)

Ацетон, чда

ГОСТ 2603-79

Вода дистиллированная

ГОСТ 7602-72

Гексан, ч

ТУ 6-09-3375-78

Дихлорметан

ГОСТ 12794-80

Калий углекислый, хч

ГОСТ 4221-76

Калия перманганат, хч

ГОСТ 20490-75

Кальция хлорид, хч

ГОСТ 4161-77

Натрия гидроксид, хч

ГОСТ 4328-77

Натрия сульфат безводный, хч

ГОСТ 4166-76

Натрий двууглекислый, хч

ГОСТ 83-79

Натрия хлорид, хч

ГОСТ 4233-77

Этилацетат

ГОСТ 22300-76

Элюент № 1 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (9:1, по объему)

Элюент № 2 для колоночной хроматографии: смесь гексан-этилацетат (8:2, по объему)

Азот газообразный, осч

ГОСТ 0203-74

Силикагель (0,063 - 0,2 мм) для адсорбционной хроматографии (Вельм, Германия) I степени активности или силикагель КСК (60-100 меш)

Стекловата

Целит 535 (2 - 15 мкм) /Серва, Германия/ или аналогичный

Фильтры бумажные, синяя лента

ТУ 6-09-1678

2.3 Приборы, аппаратура, посуда

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором с пределом детектирования по линдану не выше 3,18 ? 10-14 г/с или аналогичный

Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1500 ? 2 мм, неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм)

Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 2000 ? 2 мм, неподвижная фаза - 5 % SE-30 на Инертоне N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм)

Колонка капиллярная для ГЖХ ZB-1, длина 30 м, внутренний диаметр 0,32 мм, толщина пленки 0,5 мкм, неподвижная фаза SE-30, фирма Phenomenex, США или аналогичная

Микрошприц емкостью 10 мкл МШ-10Ф

ТУ 64-1-2850

Весы аналитические типа ВЛР-200

ГОСТ 19401-74

Водоструйный насос

ГОСТ 10696-75

Гомогенизатор или аналогичный

МРТУ 42-1505-63

Прибор для перегонки при атмосферном давлении

Ротационный испаритель тип ИР-1М

ТУ 25-11-917-76

Баня водяная

ТУ 46-22-603-75

Воронка Бюхнера

ГОСТ 0147-73

Воронки делительные, вместимостью 100 мл

ГОСТ 25336-82

Воронки для фильтрования, стеклянные

ГОСТ 8613-75

Колба Бунзена

ГОСТ 5614-75

Колбы круглодонные на шлифе, вместимостью 10 и 100 мл

ГОСТ 9737-70

Колбы мерные, вместимостью 25, 50 и 100 мл

ГОСТ 1770-74

Пипетки мерные, вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл

ГОСТ 20292-74Е

Пробирки градуированные с притертыми пробками, вместимостью 5 и 10 мл

ГОСТ 10515-75

Стаканы стеклянные емкостью 400 мл

ГОСТ 6236-72

Цилиндры мерные, вместимостью 50, 100 и 250 мл

ГОСТ 1770-74

2.4. Отбор проб

Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" (от 21.08.79 № 2051-79). Отобранные пробы огурцов, томатов и винограда хранят в стеклянной или полиэтиленовой таре в холодильнике не более двух дней; при длительном хранении (не более трех месяцев) пробы замораживают и хранят в морозильной камере при температуре -18 °С. Перед анализом ягоды и плоды измельчают.

2.5. Подготовка к определению

2.5.1. Подготовка и очистка реактивов и растворителей

Органические растворители перед началом работы очищают, сушат и перегоняют в соответствии с типовыми методиками. Гексан и хлористый метилен встряхивают с небольшими порциями концентрированной серной кислоты до тех пор, пока свежая порция кислоты не перестанет окрашиваться. Затем растворители последовательно промывают водой, 2,5 %-ным раствором гидроксида натрия и снова водой, после чего сушат над гидроксидом натрия и перегоняют.

Ацетон перегоняют над перманганатом калия и поташом (на 1 л ацетона 10 г KMnO4 и 2 г K2CO3).

Этилацетат промывают равным объемом 5 %-го раствора двууглекислого натрия, сушат над хлористым кальцием и перегоняют.

Силикагель I степени активности встряхивают с двойным объемом очищенного ацетона и затем фильтруют на воронке Бюхнера через бумажный фильтр. Силикагель на фильтре промывают 1,5 объемом ацетона и затем высушивают при температуре 130 °С в течение 3 ч.

2.5.2. Подготовка и кондиционирование колонки

Готовую насадку (3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP) засыпают в стеклянную колонку, уплотняют под вакуумом, колонку устанавливают в термостат хроматографа, не подсоединяя к детектору, и стабилизируют в токе азота при температуре 270 °С в течение 8 - 10 ч.

2.5.3. Приготовление стандартных растворов

Основной стандартный раствор крезоксим-метила с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,9 % д.в., в этилацетате в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике не более месяца.

Рабочие растворы с концентрациями 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора крезоксим-метила соответствующим последовательным разбавлением этилацетатом. Рабочие растворы хранят в холодильнике не более трех дней.

При изучении полноты открывания крезоксим-метила в модельных матрицах используются ацетоновые растворы вещества.

2.5.4. Построение калибровочного графика

Для построения калибровочного графика в инжектор хроматографа вводят по 2 мкл рабочего стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 0,1; 0,2; 0,5 и 1,0 мкг/мл. Осуществляют не менее 5 параллельных измерений и находят среднее значение площади хроматографического пика для каждой концентрации. Строят калибровочный график зависимости площади хроматографического пика в мВ ? с от концентрации крезоксим-метила в растворе в мкг/мл.

2.5.5. Подготовка колонки с силикагелем для очистки экстракта

В нижнюю часть стеклянной колонки длиной 25 см и внутренним диаметром 1,2 см вставляют тампон из стекловаты, закрывают кран и вносят суспензию 5 г силикагеля в 10 мл гексана. Дают растворителю стечь до верхнего края сорбента и помещают на него слой безводного сульфата натрия высотой 1 см. Колонку последовательно промывают 25 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и 20 мл гексана со скоростью 1 - 2 капли в секунду, после чего она готова к работе.

2.5.6. Проверка хроматографического поведения крезоксим-метила на колонке с силикагелем

В круглодонную колбу емкостью 10 мл отбирают 1 мл стандартного раствора крезоксим-метила с концентрацией 1 мкг/мл. Отдувают растворитель током теплого воздуха, остаток растворяют в 3 мл смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) и наносят на колонку. Промывают колонку 40 мл смеси гексан-этилацетат (9:1, по объему) и затем 50 мл смеси гексан-этилацетат (8:2, по объему) со скоростью 1 - 2 капли в секунду. Отбирают фракции по 10 мл каждая, упаривают досуха, остаток растворяют в 2 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.

Фракции, содержащие крезоксим-метил, объединяют, упаривают досуха, остаток растворяют в 4 мл этилацетата и вновь анализируют по п. 2.7.1. Рассчитывают содержание крезоксим-метила в элюате, определяют полноту вымывания вещества из колонки и необходимый для очистки экстракта объем элюента.

Примечание: профиль вымывания крезоксим-метила может меняться при использовании новой партии сорбента и растворителей.

2.6. Описание определения

2.6.1. Экстракция крезоксим-метила и очистка экстракта

2.6.1.1. Огурцы, томаты, виноград. К навеске (25 г) измельченного материала добавляют 100 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему), гомогенизируют 3 минуты при 10000 об/мин. Добавляют 2 г целита и фильтруют под вакуумом на воронке Бюхнера через бумажный фильтр в колбу емкостью 250 мл. Осадок на фильтре промывают 50 мл смеси ацетон-вода (2:1, по объему). Из объединенного экстракта отбирают аликвоту раствора (около 30 мл), эквивалентную 5 г растительного материала, и упаривают ее до водной фазы на роторном вакуумном испарителе при температуре 40 °С. Водный остаток переносят в делительную воронку емкостью 100 мл, приливают 10 мл насыщенного раствора хлорида натрия и 20 мл гексана. Смесь встряхивают в течение 1 мин и после ее расслоения отделяют гексановый слой, который пропускают через стеклянный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия, в грушевидную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию водной фракции гексаном повторяют еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт, содержащий крезоксим-метил, выпаривают на роторном испарителе досуха при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

2.6.1.2. Виноградный сок. К 10 мл свежевыжатого сока добавляют 20 мл насыщенного раствора хлорида натрия и содержимое переносят в делительную воронку емкостью 100 мл. В воронку добавляют 20 мл гексана и смесь встряхивают в течение 1 мин. После разделения слоев собирают органическую фракцию, а водную фазу обрабатывают гексаном еще два раза (по 20 мл). Объединенный гексановый экстракт пропускают через слой безводного сульфата натрия и упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Дальнейшую очистку экстракта проводят по п. 2.6.3.

2.6.3. Очистка на колонке с силикагелем

Остаток в колбе, полученный при упаривании экстрактов растительного материала (из п. 2.6.1.1 и 2.6.1.2), количественно переносят тремя 1-мл порциями смеси гексан-этилацетат (95:5, по объему) в подготовленную хроматографическую колонку (п. 2.5.5). Промывают колонку 30 мл смеси гексан-этилацетат (9:1), которые отбрасывают. Крезоксим-метил элюируют 35 мл смеси гексан-этилацетат (8:2), собирая элюат в грушевидную колбу емкостью 100 мл. Раствор упаривают досуха на роторном испарителе при температуре 30 °С. Сухой остаток экстракта сока растворяют в 10 мл, а экстрактов огурцов, томатов и винограда в 5 мл этилацетата и анализируют на содержание крезоксим-метила по п. 2.7.1.

2.7. Условия хроматографирования

2.7.1. Метод ГЖХ с насадочными колонками

Хроматограф газовый "Кристалл - 2000 М" с электронозахватным детектором (Ni63) с пределом детектирования по линдану не выше 3,18 ? 10-14 г/см3.

Колонка хроматографическая, набивная, стеклянная, 1 500 ? 3 мм; неподвижная фаза - 3 % OV-17 на Хромосорбе W/HP (0,12 - 0,15 мм).

Температура детектора 300 °С, инжектора 270 °С, термостата колонки 240 °С.

Скорость потока газа-носителя (азота) - 30 мл/мин; поддув - 25 мл/мин.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Время удерживания крезоксим-метила - 3 мин 10 с.

Предел детектирования - 0,1 нг.

Линейный диапазон детектирования - 0,1 - 1,0 нг.

Альтернативная неподвижная фаза: 5 % SE-30 на Инертоне N-AW DMCS (0,16 - 0,20 мм); колонка стеклянная 2000 ? 2 мм; условия хроматографирования те же.

Каждую анализируемую пробу вводят в хроматограф 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 1,0 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.7.2. Метод ГЖХ с капиллярными колонками

Хроматограф газовый "Кристалл 2000 М" с электронозахватным детектором.

Колонка капиллярная кварцевая ZB-1, 30 м ? 0,32 мм ? 0,5 мкм (SE-30).

Температура термостата испарителя - 250 °С, детектора - 300 °С, термостата колонки в программируемом режиме: 120 °С - 1 мин; 20°/мин до 250 °С; выдержка - 5 мин.

Газовый режим: газ-носитель - азот, общий расход - 33 мл/мин; газ для поддува в детектор - азот, расход - 30 мл/мин.

Деление потока: 1:5.

Абсолютное время удерживания крезоксим-метила: 9 мин 34 с.

Объем вводимой пробы - 2 мкл.

Линейный диапазон детектирования: 0,02 - 0,5 нг.

Каждую анализируемую пробу вводят 3 раза и вычисляют среднюю площадь хроматографического пика крезоксим-метила.

Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 0,2 мкг/мл, разбавляют этилацетатом.

2.8. Обработка результатов анализа

Содержание крезоксим-метила рассчитывают методом абсолютной калибровки по формуле:

где

Х - содержание крезоксим-метила в пробе, мг/кг или мг/дм3;

H1 - площадь пика образца, мВ ? с;

H0 - площадь пика стандарта, мВ ? с;

А - концентрация стандартного раствора крезоксим-метила, мкг/мл;

V - объем экстракта, подготовленного для хроматографирования, мл;

m - объем (мл) или масса (г) анализируемой части образца (для сока 10 мл; для плодов и ягод - 5 г).

3. Требования техники безопасности

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами и сжатыми газами.

4. Контроль погрешности измерений

Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ. Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа.

5. Разработчики

Дубовая Л.В., Талалакина Т.Н., Макеев А.М.

ВНИИ фитопатологии, 143050, Московская обл., п/о Большие Вяземы, тел. 592-92-20.

Руководитель Федеральной службы
по надзору в сфере защиты прав
потребителей и благополучия человека,
Главный государственный санитарный
врач Российской Федерации

Г.Г. Онищенко




Реклама: ;


Самые популярные документы раздела



Рейтинг@Mail.ru Яндекс.Метрика